免疫组化(Immunohistochemistry, IHC)是一种组织学上广泛应用的染色技术,其原理是利用抗体与特异性抗原间的亲和作用,在细胞、组织、器官中检测和定位抗原蛋白的存在位置和数量。具体的方法包括以下几步:
1.标本制备:收集组织标本后固定、包埋、切片,保证标本完整无缺损。
2.抗原恢复:将组织标本以高压(压力釜或热水浴)或酶解(如胰蛋白酶消化)的方式,使蛋白质折叠复原,方便抗体结合。
3.抗体结合:将特异性抗原蛋白与荧光素或酶标记的特异性抗体结合,组织标本中的特异性抗原蛋白受到抗体標識,并形成复合物。
4.色素显色:如酶标法,加入底物激活酶的电子给体,可引发底物颜色变化(常见的是DAB),结构简单,容易显色。如荧光素标记,荧光素基团使得标本呈现特别的荧光信号。
5.染色显微镜下观察:检测抗原在细胞、组织中的定位,可以利用显微镜对样本进行观察。
免疫组化具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点,因此被广泛应用于肿瘤组织变异性、诊断与治疗预测等方面。
Image: